(57) Verfahren und Testträger zur Bestimmung eines Analyten aus einer Probe, insbesondere einer Körperflüssigkeit.
Es werden zwei spezifisch miteinander bindungsfähige Biomaterialien (Bindungspartner) verwendet, von denen der eine Bindungspartner enzymatisch markiert und nicht trägerfixiert und der andere trägerfixiert ist.
Das Verfahren enthält einen Reaktionsschritt, bei dem die Bindungspartner miteinander inkubiert werden, so daß eine spezifische Bindungsreaktion zwischen ihnen abläuft, wobei nach Ablauf der spezifischen Bindungsreaktion die Menge des nicht an den trägerfixierten Bindungspartner gebundenen enzymatisch markierten Bindungspartners ein Maß für die Konzentration des Analyten ist. Diese Menge wird bestimmt, indem man während der spezifischen Bindungsreaktion zugleich mit einem nicht fixierten, kein Nachweissignal erzeugenden Substrat des Markierungsenzyms und mit einem trägerfixierten, ein Nachweissignal erzeugenden Substrat des Markierungsenzyms inkubiert, wobei das kein Nachweissignal erzeugende Substrat so gewählt ist, daß bei gleichzeitiger Inkubation des freien, enzymatisch markierten Bindungspartners mit beiden Substraten die enzymatisch katalysierte Reaktion des ein Nachweissignal erzeugenden Substrat so lange verzögert wird, bis die spezifische Bindungsreatkon zwischen den Bindungspartnern im wesentlichen abgelaufen ist.