[0001] La présente invention se rapporte à l'utilisation en thérapie, notamment dans le
domaine de la dermatologie, de composés biphényliques substitués par un radical aromatique
à activité sélective pour le sous-type gamma de la famille des récepteurs RAR.
[0002] Une famille de composés biphényliques a été décrite dans la demande de brevet
WO 99/10308. Ces composés sont décrits comme ayant une application dans le traitement topique
et systémique des affections dermatologiques liées à un désordre de la kératinisation
et des affections ophtalmologiques, notamment.
[0003] L'activité de ces composés a notamment été mise en évidence par des tests de différenciation
des cellules F9 de tératocarcinome embryonnaire de la souris et des tests de différenciation
des kératinocytes chez l'homme.
[0004] En revanche, ce document ne fait nullement état d'une éventuelle activité spécifique
des composés vis-à-vis du sous-type gamma des récepteurs RAR.
[0005] Or, le sous type gamma de la famille des récepteurs RAR est largement majoritaire
dans l'épiderme où il représente environ 90% du total des récepteurs (
« Retinoic acid receptors and binding proteins in human skin », Elder JT, Astrom A,
Pettersson U, Tavakkol A, Krust A, Kastner P, Chambon P, Voorhees JJ : J Invest Dermatol.
1992;98 (6 Suppl): 36S-41S ; ou : "
Retinoic acid receptor expression in human skin keratinocytes and dermal fibroblasts
in vitro", Redfern CP, Todd C. J Cell Sci. 1992;102 (Pt 1):113-21) et c'est bien l'interaction avec ce récepteur RAR gamma qui est responsable de l'efficacité
des rétinoïdes sur l'épiderme (
« Retinoic acid receptor gamma mediates topical retinoid efficacy and irritation in
animal models», Chen S, Ostrowski J, Whiting G, Roalsvig T, Hammer L, Currier SJ,
Honeyman J, Kwasniewski B, Yu KL, Sterzycki R, et al. J Invest Dermatol. 1995;104
(5): 779-83).
[0006] Les récepteurs RAR gamma sont donc la seule cible dans le traitement de pathologies
au niveau de l'épiderme comme par exemple pour l'acné ou le psoriasis ou toute autre
pathologie cutanée traitée par les rétinoïdes.
[0007] D'autre part, certains effets secondaires propres à RAR alpha ou RAR beta peuvent
être évités si on utilise des composés ayant une action sélective sur RAR gamma.
[0008] De façon surprenante, il a maintenant été montré que les composés selon l'invention
présentent une activité agoniste sélective pour le sous-type gamma de la famille des
récepteurs RAR extrêmement intéressante.
[0009] Les composés selon l'invention, agonistes sélectifs du sous-type RAR gamma, permettent
ainsi de prévenir et/ou traiter diverses pathologies ou désordres dermatologiques,
tout en diminuant les effets secondaires habituellement dus à l'action des actifs
sur les sous-types RAR alpha et beta.
[0010] La présente invention a donc pour premier objet des composés qui peuvent être représentés
par la formule générale suivante :
dans laquelle R représente un hydrogène ou un radical hydroxyl, ainsi que les sels
des composés de formule (I).
[0011] Par sel pharmaceutiquement acceptable, on entend notamment un sel de métal alcalin,
ou un sel alcalino-terreux, ou un sel d'amine organique.
[0012] Selon une forme de réalisation préférée, les composés de formule (I) sont choisis
parmi l'acide 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique,
et l'acide 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique.
[0013] L'invention vise également l'utilisation d'au moins un composé de formule (I) pour
la préparation d'une composition pharmaceutique ou cosmétique destinée à prévenir
et/ou traiter des pathologies pour lesquelles une activité agoniste sélective pour
le sous-type gamma de la famille des récepteurs RAR est désirée.
[0014] Une voie de synthèse générale pour préparer les composés de formule (I) est représentée
dans le schéma selon la figure 1.
[0015] Les matières premières et/ou les réactifs utilisés sont disponibles commercialement
et/ou peuvent être préparés selon des méthodes connues de la littérature.
[0016] Selon un autre aspect, la présente invention concerne également un procédé de préparation
des composés de formule (I) précédemment décrits comprenant les étapes suivantes :
- i) réaction de couplage, de préférence de type réaction de Suzuki, entre le composé
de formule 1 préparé par exemple comme décrit dans la demande de brevet WO 99/10308 :
et le composé de formule 2 préparé par exemple comme décrit dans la demande de brevet WO 99/10308:
pour conduire au composé de formule 3,
- ii) réaction de la fonction phénol du composé de formule 3 avec l'anhydride triflique ((CF3CO)2O), selon des méthodes connues dans la littérature (voir par exemple Kotsuki H. & coll., Synthesis, 1990, (12), 1145-1147 ou Prince P. & coll., Synlett, 1991, (6), 405-406) pour conduire au composé de formule 4,
- iii) réaction de type couplage de Stille du composé de formule 4 avec de l'allyle tri-n-butyle étain (CH2=CH-CH2-SnBu3) selon des méthodes connues dans la littérature (voir par exemple Tilley J.W. & coll., J.Org.Chem. 1990, 55(3), 906 ou Saa J.M. & coll., J.Org.Chem. 1992, 57(2), 678-685) pour conduire au composé de formule 5,
- iv) hydratation de la double liaison allylique du composé de formule 5, par exemple par une réaction classique d'hydroboration suivie d'une oxydation, selon
des méthodes connues dans la littérature (voir par exemple : Liotta, R., Brown, H. C. J. Org. Chem. 1977, 42, 2836 ou Luo, F. T., Negishi, E. J. Org. Chem. 1983, 48, 5144) ou di-hydroxylation de la double liaison allylique du composé de formule 5 selon
des méthodes connues dans la littérature (voir par exemple : Corey, E. J& coll. Tetrahedron Lett 1984, 25 (44), 5013, Sharpless, K. B. & coll. J. Am. Chem. Soc. 1976, 98 (7), 1986) pour conduire aux composés de formule 6, avec respectivement R = H et R = OH :
- v) saponification de la fonction ester du composé de formule 6 pour conduire au composé
de formule (I) (composé 7 dans la figure 1) dans laquelle R représente un hydrogène
ou un radical hydroxyle.
[0017] L'étape i) peut par exemple être réalisée en présence de carbonate de potassium,
de Tetrakis(triphénylphosphine)palladium dans une solution de toluène.
[0018] L'étape ii) peut par exemple être réalisée en présence d'anhydride trifluorométhanesulfonique
et d'une base comme la triéthylamine dans un solvant aprotique comme le dichlorométhane.
[0019] L'étape iii) peut par exemple être réalisée en présence d'un catalyseur au palladium
comme par exemple le chlorure de bis(triphenylphosphine) palladium (PdCl
2(PPh
3)
2) ou encore le tris(dibenzylidèneactone) dipalladium (Pd
2(dba)
3) dans un solvant polaire comme par exemple le diméthylformamide.
[0020] L'étape iv) peut par exemple être réalisée en présence de tetraoxyde d'osmium catalytique
et d'un oxydant comme par exemple le N-oxyde de N-méthyl morpholine . Comme indiqué
ci-dessus, dans ce cas la réaction conduit au composé 6 dans lequel R représente le
radical hydroxyle.
[0021] Alternativement, l'étape iv) peut également être réalisée en présence d'un borane
comme par exemple le 9-borabicyclo [3.3.1] nonane (9-BBN) suivi d'une oxydation utilisant
par exemple de l'eau oxygénée. Dans ce cas, la réaction conduit au composé 6 dans
lequel R représente l'hydrogène.
[0022] L'étape v) peut par exemple être réalisée en présence de d'hydroxyde de sodium et
de THF.
[0023] La présente invention a également pour objet les composés de formule (I) tels que
décrits ci-dessus à titre de médicament.
[0024] Selon un autre aspect, l'invention a pour objet une composition pharmaceutique ou
cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend dans un véhicule pharmaceutiquement
ou cosmétiquement acceptable au moins un composé de formule (I).
[0025] Par "véhicule pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable", on entend un véhicule
adapté pour une utilisation en contact avec des cellules d'humains et d'animaux, sans
toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaires, et proportionné à un
rapport avantage/risque raisonnable.
[0026] L'administration peut être effectuée par voie topique, entérale ou orale, parentérale
ou oculaire. Parmi ces voies d'administration, la voie topique est particulièrement
préférée.
[0027] Par voie topique, la composition pharmaceutique selon l'invention est plus particulièrement
destinée au traitement de la peau et des muqueuses et peut se présenter sous forme
liquide, pâteuse, ou solide, et plus particulièrement sous forme d'onguents, de crèmes,
de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de syndets, de solutions, de
gels, de sprays, de mousses, de suspensions, de sticks, de shampoings, ou de bases
lavantes. Elle peut également se présenter sous forme de suspensions de microsphères
ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patches polymériques
ou gélifiés permettant une libération contrôlée.
[0028] Les composés sont utilisés par voie topique à une concentration généralement comprise
entre 0,001 % et 3% en poids, par rapport au poids total de la composition.
[0029] Pour une application cosmétique, la composition est de préférence sous forme d'une
crème, d'un lait, d'une lotion, d'un gel, de microsphères ou nanosphères ou vésicules
lipidiques ou polymériques, d'un savon, d'un shampooing.
[0030] Par voie entérale ou orale, la composition, peut se présenter sous forme de comprimés,
de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granulés,
d'émulsions, de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques
ou polymériques permettant une libération contrôlée. Par voie parentérale, la composition
peut se présenter sous forme de solutions ou suspensions pour perfusion ou pour injection.
[0031] Les composés selon l'invention sont généralement administrés à une dose journalière
d'environ 0,01 mg/kg à 30 mg/kg de poids corporel, en 1 à 3 prises.
[0032] Les composés de l'invention sont utiles, seuls ou en mélange, pour la préparation
d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention de pathologies
liées à une déficience de l'activation du récepteur RAR gamma.
[0033] L'invention concerne également une méthode de traitement thérapeutique ou cosmétique,
comprenant l'administration d'une composition pharmaceutique ou cosmétique comprenant
au moins un composé de formule (I), ledit composé exerçant une activité agoniste sélective
du récepteur RAR gamma.
[0034] La composition pharmaceutique peut être plus particulièrement destinée à traiter
une pathologie pour le traitement de laquelle une activité agoniste sélective du récepteur
RAR gamma est désirée, plus particulièrement au niveau des tissus épithéliaux, de
la peau et des os.
[0035] La composition est notamment utile pour le traitement d'une pathologie liée aux désordres
de la différenciation et/ou de la prolifération cellulaire, en particulier dans le
domaine de la dermatologie.
[0036] Plus particulièrement, elle est utile pour le traitement d'une pathologie liée à
un désordre de la kératinisation.
[0037] Le traitement de l'acné est ainsi envisagé, notamment les acnés vulgaires, comédoniennes,
polymorphes, les acnés nodulokystiques, conglobata, les acnés séniles, les acnés secondaires
tels que l'acné solaire, médicamenteuse, professionnelle.
[0038] La composition pharmaceutique comprenant un composé de formule (I) est également
utile pour traiter d'autres affections dermatologiques liées à un trouble de la kératinisation
avec une composante inflammatoire et/ou immunoallergique et, notamment, toutes les
formes de psoriasis, qu'il soit cutané, muqueux ou unguéal.
[0039] Les composés selon l'invention sont également utiles dans une composition cosmétique,
pour lutter contre le vieillissement cutané, qu'il soit par exemple photoinduit ou
chronologique, ou encore pour le traitement des peaux à tendance acnéique ou pour
lutter contre l'aspect gras de la peau ou des cheveux.
[0040] La composition pharmaceutique ou cosmétique peut permettre en outre la régulation
des pigmentations de la peau et le traitement des kératoses actiniques.
[0041] Dans toutes les applications envisagées, ledit composé peut être associé à un autre
agent thérapeutique utile dans le traitement d'une pathologie liée aux désordres de
la différenciation ou de la prolifération cellulaire.
[0042] Comme agents thérapeutiques utilisables dans les compositions selon l'invention,
on peut citer les agents modulant la différenciation et/ou la prolifération et/ou
la pigmentation cutanée tels que l'acide rétinoïque et ses isomères, le rétinol et
ses esters, le rétinal, les rétinoïdes, les estrogènes, les antibactériens, les antibiotiques,
les antiparasitaires, les antifongiques, les agents anti-inflammatoires stéroïdiens
ou non-stéroïdiens, les agents anesthésiques, les agents antiprurigineux, les agents
antiviraux, les agents kératolytiques, les agents anti-radicaux libres, les anti-séborrhéiques,
les antipelliculaires, les anti-acnéiques, les agents pour lutter contre la chute
des cheveux, la vitamine C et ses dérivés sous réserve, comme cela est indiqué précédemment,
que les actifs soient sous forme solubilisée dans la composition selon l'invention.
[0043] Les exemples suivants illustrent l'invention, sans toutefois la limiter. Les produits
de départs utilisés sont des produits connus ou préparés selon des modes opératoires
connus.
[0044] Dans les exemples ci-après, les échantillons ont été analysés par RMN
1H et RMN
13C, HPLC/MS.
Exemple 1 : Synthèse de l'acide 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
[0045]
a) 4'-Hydroxy-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle:
[0046] Dans un tricol, 10 g (31 mmol) de 3'-bromo-4'-hydroxy-biphenyl-4-carboxylate d'éthyle
(préparé selon
EP952974), 8,7 g (37 mmol) d'acide 6-(1,1,4,4-tetraméthyl-1,2,3,4-tetrahydronaphtalène) boronique
(préparé selon
EP952974), et 34 mL (74,6 mmol) d'une solution aqueuse 2M de carbonate de potassium sont placés
dans 200 mL de toluène, puis 1,8 g (1,55 mmol) de tetrakis (triphénylphosphine) palladium
sont additionnés sous azote. Le mélange réactionnel est chauffé pendant 24 h à 110
°C. Après refroidissement, la réaction est arrêtée par addition de 200 mL d'eau puis
extraite à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par
une solution de chlorure de sodium saturée et séchées sur sulfate de magnésium. Les
solvants sont évaporés puis le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice
(Heptane/Acétate d'éthyle 80/20).
[0047] 8 g de 4'-hydroxy-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle sont obtenus sous la forme d'un solide blanc (rendement = 60 %).
b) 3'-(5,5,8,8-Tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-4'-trifluoro methanesulfonyloxy-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle:
[0048] Dans un tricol sous azote, 8,8 mL (63 mmol) de triéthylamine sont ajoutés goutte
à goutte sur 18 g (42 mmol) de 4'-hydroxy-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle en solution dans 250 mL de dichlorométhane. Le milieu réactionnel est refroidi
vers 0°C puis 8,48 mL (50 mmol) d'anhydride trifluorométhanesulfonique sont additionnés
goutte à goutte. Le milieu réactionnel est agité pendant 3h à 0°C, puis il est hydrolysé,
lavé avec une solution de bicarbonate de soude et séché sur sulfate de magnésium.
Après évaporation des solvants, le produit isolé est purifié par chromatographie sur
gel de silice (Heptane/ Acétate d'éthyle = 95/5).
[0049] 24g de 3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-4'-trifluoro methanesulfonyloxy-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle sont obtenus sous forme d'une poudre blanche (rendement = 100%).
c) 4'-Allyl-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl -4-carboxylate
d'ethyle:
[0050] Dans un tricol sous azote, 6 g (10,7 mmol) de 3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-4'-trifluoromethanesulfonyloxy-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle, 0,9 g (21 mmol) de chlorure de lithium, 1,12 g (1,6 mmol) de dichlorure
de bis(triphenylphosphine) palladium, 30 mL de dimethylformamide et 3,98 mL (12,8
mmol) d'allyle tri-n-butyle étain sont introduits dans cet ordre.
[0051] Le mélange réactionnel est agité pendant 12 h à 100°C. La réaction est hydrolysée
avec une solution d'acide chlorhydrique 1 N puis extraite avec de l'acétate d'éthyle.
Les phases organiques sont rassemblées, lavées par une solution aqueuse de chlorure
de sodium saturée, et séchées sur sulfate de magnésium. Les solvants sont évaporés.
Le brut obtenu sous forme d'huile est purifié par chromatographie sur gel de silice
(Heptane/ Acétate d'éthyle : = 95/5).
[0052] 6,1 g de 4'-allyl-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl
-4-carboxylate d'éthyle sont obtenus sous la forme d'une huile jaune claire (rendement
= 100 %).
d) 4'-(3-Hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'ethyle :
[0053] Dans un tricol sous azote, 0,5 g (1,1 mmol) de 4'-allyl-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle sont introduits dans 20 mL de tétrahydrofuranne. Cette solution est refroidie
à 0°C, puis 6,6 mL (3,3 mmol) d'une solution de 9-borabicyclo[3.3.1]nonane 0,5 M dans
le tétrahydrofuranne est additionnée goutte à goutte. Après complète addition, le
milieu réactionnel est agité jusqu'à revenir à température ambiante. Il est agité
encore une heure à cette température, puis refroidi de nouveau vers 0°C. 3,4 mL (3,4
mmol) d'une solution 1 M de soude sont additionnés lentement au milieu réactionnel,
puis 2,8 mL (27,6 mmol) d'une solution d'eau oxygénée à 30% sont additionnés goutte
à goutte. Après complète addition, le milieu réactionnel est agité en laissant remonter
la température à l'ambiant. Le milieu est agité 12h à cette température, puis il est
hydrolysé avec une solution de chlorure d'ammonium. La phase aqueuse est extraite
à l'acétate d'éthyle et les phases organiques réunies sont lavées à l'eau, puis séchées
sur sulfate de magnésium. Les solvants sont évaporés. Le brut obtenu est purifié par
chromatographie sur gel de silice (Heptane/Acétate d'éthyle : = 95/5)
[0054] 300 mg de 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle sont obtenus sous la forme d'une huile incolore (rendement = 58 %).
e) Acide 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxyliaue:
[0055] 1 mL (1 mmol) d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (1 M) est ajouté à une
solution de 300 mg (0,64 mmol) de 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle dans 15 mL de tétrahydrofuranne et 1 mL d'éthanol. Le mélange réactionnel
est agité pendant 14 h en chauffant à 50 °C. Après être revenu à température ambiante,
2 mL (2 mmol) d'une solution d'acide chlorhydrique (1 N) sont additionnés. Le milieu
est extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'eau, puis séchée
sur sulfate de magnésium. Après évaporation des solvants, le produit obtenu est purifié
par chromatographie sur gel de silice (Heptane/ Acétate d'éthyle : = 3/2).
[0056] 230 mg d'acide 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
sont obtenus (solide blanc, P.F.=203°C, rendement = 90 %).
Exemple 2 : Synthèse de l'acide 4'-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
[0057]
a) 4'-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle:
[0058] Dans un tricol sous azote, 2,84 g (6,3 mmol) de 4'-allyl-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d'éthyle (préparé selon exemple 1, étape c) sont introduits dans 15 mL de dichlorométhane,
puis 1,0 g (7,5 mmol) de N-oxyde de N-methyl morpholine est ajouté.
[0059] 2,27 mL (0,18 mmol) d'une solution de tetraoxyde d'osmium à 2,5% en poids dans l'isopropanol
sont additionnés à température ambiante. Le milieu réactionnel devient jaune foncé.
Il est agité pendant 3h à température ambiante, puis il est hydrolysé et extrait au
dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavées au thiosulfate de sodium
puis séchées sur sulfate de magnésium. Après évaporation des solvants, le produit
obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (Heptane/ Acétate d'éthyle
= 1/1).
[0060] 1,92 g de 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d' éthyle sont obtenus sous forme d'une huile beige (rendement = 63 %).
b) acide 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique:
[0061] 1 mL (1 mmol) d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (1 M) est ajouté à une
solution de 200 mg (0,41 mmol) de 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylate
d' éthyle dans 5 mL de tétrahydrofuranne et 2 mL d'éthanol. Le mélange réactionnel
est agité pendant 48 h en chauffant à 50 °C. Après être revenu à température ambiante,
2 mL (2 mmol) d'une solution d'acide chlorhydrique (1 N) sont additionnés. Le milieu
est extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'eau, puis séchée
sur sulfate de magnésium. Après évaporation des solvants, le produit obtenu est purifié
par cristallisation dans un mélange heptane/ Ether diéthylique.
[0062] 180 mg d'acide 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
sont obtenus (solide beige, P.F.=145°C, rendement = 96 %).
Exemple 3 : Test de transactivation
a) Principe du test :
[0063] L'activation des récepteurs par un agoniste (activateur) dans des cellules HeLa conduit
à l'expression d'un gène reporter, la luciférase, qui, en présence d'un substrat génère
de la lumière. On peut donc mesurer l'activation des récepteurs en quantifiant la
luminescence produite après incubation des cellules en présence d'un antagoniste de
référence. Les produits activateurs déplacent l'antagoniste de son site permettant
ainsi l'activation du récepteur. La mesure de l'activité se fait par la quantification
de l'augmentation de la lumière produite. Cette mesure permet de déterminer l'activité
activatrice du composé utile dans l'invention.
[0064] Dans cette étude est déterminée une constante qui représente l'affinité de la molécule
pour le récepteur. Cette valeur pouvant fluctuer selon l'activité basale et l'expression
du récepteur, on la désigne Kd apparent (KdApp).
[0065] Pour déterminer cette constante, des « courbes croisées » du produit à tester (acide
4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
et acide 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique),
contre un antagoniste de référence autrement nommé ligand de référence, l'acide 4-(5,5-dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydro-naphthalen-2-ylethynyl)-benzoïque
sont réalisées. Le produit à tester est utilisé à 10 concentrations et l'antagoniste
de référence à 7 concentrations. Dans chaque puit (d'une plaque à 96 puits), les cellules
sont en contact d'une concentration du produit à tester et d'une concentration de
l'antagoniste de référence.
[0066] Des mesures sont également réalisées pour les témoins agoniste total autrement nommé
témoin 100% (l'acide 4-[2-(5,5,8,8 tetramethyl-5,6,7,8 tetrahydronaphtalene-2-yl)propenyl]-benzoique)
et agoniste inverse autrement nommé témoin 0%, (l'acide 4-{(E)-3-[4-(4-tert-butyl-phenyl)-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl]-3-oxo-propenyl)-benzoïque).
[0068] Dans le cas d'un agoniste, l'AC50 est calculée en traçant la courbe du produit à
la concentration du ligand de référence donnant 80% d'activation. Le pourcentage d'activation
qui correspond au niveau maximum d'activité obtenue est également mesuré.
b) Matériels et Méthode :
[0069] Les lignées cellulaires HeLa utilisées sont des transfectants stables contenant les
plasmides ERE-βGlob-Luc-SV-Neo (gène reporter) et RAR (α, β, γ) ER-DBD-puro. Ces cellules
sont ensemencées en plaques 96 puits à raison de 10 000 cellules par puit dans 100µl
de milieu DMEM sans rouge de phénol et supplémenté par 10% de sérum de veau délipidé.
Les plaques sont ensuite incubées à 37°C, 7% CO
2 pendant 4 heures.
[0070] Les différentes dilutions du produit à tester, du ligand de référence (l'acide 4-(5,5-dimethyl-8-p-tolyl-5,6-dihydro-naphthalen-2-ylethynyl)-benzoique),
du témoin 100% (l'acide 4-[2-(5,5,8,8 tetramethyl-5,6,7,8 tetrahydronaphtalene-2-yl)propenyl]-benzoïque
100 nM) et du témoin 0% (l'acide 4-{(E)3-[4-(4-tert-butyl-phenyl)-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl]-3-oxo-propenyl}-benzoïque
500 nM) sont rajoutées à raison de 5 µl par puits. Les plaques sont ensuite incubées
18 heures à 37°C, 7% CO
2.
[0071] Le milieu de culture est éliminé par retournement et 100 µl d'un mélange 1:1 PBS
(solution tampon de phosphate)/Luciférine est ajouté à chaque puit. Après 5 minutes,
les plaques sont lues par le lecteur de luminescence.
c) Résultats :
[0072] Les valeurs des constantes Kd apparent sont indiquées dans le tableau ci-après. Ces
valeurs sont comparées à celles des composés de la demande de brevet
WO 99/10308 présentant les meilleures activités
|
RAR alpha Kdapp (nM) |
RAR béta Kdapp (nM) |
RAR gamma Kdapp (nM) |
Composé de l'exemple 1 |
15 |
2 |
0.1 |
Composé de l'exemple 2 |
60 |
15 |
0.5 |
Composés de WO 99/10308 : |
|
|
|
Acide 3"-methyl-2'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalén-2-yl)-[1,1' ;4',1"]terphenyl-4"-carboxylique
(Exemple41) |
2 |
1 |
0,25 |
Acide 3"-hydroxy-2'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-[1,1';4',1"]terphenyl-4"-carboxylique
(Exemple46) |
2 |
1 |
0,25 |
Acide 2"-methoxy-2'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-[1,1';4',1"]terphenyl-4"-carboxylique(Exemple44) |
4 |
2 |
0,5 |
Acide 2"-hydroxy-2'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-[1,1';4',1"]terphenyl-4"-carboxylique
(Exemple42) |
8 |
4 |
1 |
Acide 6-[2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-yl]-nicotinique
(Exemple47) |
4 |
1 |
1 |
Acide 2'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-[1,1' ;4',1"] terphenyl-4"-carboxylique
(Exemple14) |
2 |
1 |
1 |
[0073] Les résultats obtenus avec l'acide 4'-(3-hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique,
et l'acide 4'-(2,3-dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
montrent bien une meilleure sélectivité de ces composés pour le sous-type de récepteur
RARgamma en comparaison avec les deux autres sous-types RARalpha et RARbéta. Ils montrent
également une meilleure activité et une meilleure sélectivité en comparaison avec
les composés RAR les plus actifs décrits dans la demande de brevet
WO 99/10308.
[0074] Ces composés sont donc des agonistes ou activateurs sélectifs du récepteur RARgamma.
Exemple 4 : Exemples de formulations
[0075] Dans cet exemple, on a illustré diverses formulations concrètes à base des composés
selon l'invention.
A- VOIE ORALE
(a) Comprimé de 0,2 g
[0076]
- Acide 4'-(3-Hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-y)-biphenyl-4-carboxylique
0,001 g
- Amidon 0,114 g
- Phosphate bicalcique 0,020 g
- Silice 0,020 g
- Lactose 0,030 g
- Talc 0,010 g
- Stéarate de magnésium 0,005 g
(b) Suspension buvable en ampoules de 5 ml
[0077]
- Acide 4'-(3-Hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
0,001 g
- Glycérine 0,500 g
- Sorbitol à 70% 0,500 g
- Saccharinate de sodium 0,010 g
- Parahydroxybenzoate de méthyle 0,040 g
- Arome qs
- Eau purifiée qsp 5 ml
B- VOIE PARENTERALE
(a) Composition
[0078]
- Acide 4'-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
0,05 %
- Polyéthylène glycol 20%
- Solution de NaCl à 0.9% qs 100
(b) Composition de cyclodextrine injectable
[0079]
- Acide 4'-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
0,1 mg
β- cyclodextrine 0,10 g
Eau pour injectable qsp.10,00 g
C- VOIE TOPIQUE
(a) Onguent
[0080]
- Acide 4'-(3-Hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
0,300 g
- Vaseline blanche codex qsp 100 g
(b) Crème Eau-dans-Huile non ionique
[0081]
- Acide 4'-(2,3-Dihydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphtalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
0,100 g
- Mélange d'alcools de lanoline émulsifs, de cires et d'huiles ("Eucerine anhydre" vendu
par BDF) 39,900 g
- Parahydroxybenzoate de méthyle 0,075 g
- Parahydroxybenzoate de propyle 0,075 g
- Eau déminéralisée stérile qsp 100 g
(c) Lotion
[0082]
- Acide 4'-(3-Hydroxy-propyl)-3'-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-2-yl)-biphenyl-4-carboxylique
0,100 g
- Polyéthylène glycol (PEG 400) 69,900 g
- Ethanol à 95% 30,000 g