Procédé de fabrication d'un dispositif d'allumage à plasma pour moteur à combustion interne

Abstract

 La présente invention concerne un dispositif de couplage de deux fibres optiques monomodes.
Ce dispositif comporte un premier tronçon (1) de fibre optique ayant un coeur (11) et une gaine (21) entourant ce coeur, et un second tronçon (2) ayant un cœur (12) et une gaine (22). Les deux tronçons ont été polis et assemblés, de telle manière que les deux cœurs (11) et (12) soient juxtaposés. Le cœur (11) a un rayon r₁ et le cœur (12) a un rayon r₂. Les tronçons de fibres ont été choisis de telle manière que r_{1 2} et que Δ ni < Δ n₂, où Δ n₁ représente la variation d'indice entre le cœur (11) et la gaine (21 ), et Δ n₂ la variation d'indice entre le coeur (12) et la gaine (22).
Ce dispositif est utilisé pour effectuer du multiplexage et du démultiplexage pour une longueur d'onde de couplage λ_c donnée.

Description

[0001] La présente invention se rapporte à une éprouvette de séparation par centrifugation d'un liquide physiologique et de collection d'au moins un des constituants de densité donnée.

[0002] La centrifugation est une méthode bien connue pour la séparation et la purification de cellules, de virus et de particules cellulaires. Généralement cette séparation s'opère dans un milieu de centrifugation capable d'engendrer un gradient de densité continu ou discontinu lorsqu'il est soumis à la force centrifuge. De tels substances sont fabriquées notamment par Pharmacia Fine Chemicals AB à Uppsala en Suède et vendues sous les marques de commerce "Per- coll" et "Fiooll-Paque".

[0003] En pratique le temps de centrifugation nécessaire à la séparation des particules, dans un milieu de viscosité donnée, est une fonction de la hauteur de la colonne de liquide dans le tube d'analyse.

[0004] Il est fréquent que les particules à séparer et à extraire forment, après centrifugation, une couche très mince, de l'ordre du millimètre ou même moins. Il s'ensuit que l'extraction de ces particules constitue une opération délicate qui requiert une grande minutie et de l'habilité. Cette opération est réalisée manuellement et son automatisation pose évidemment des problèmes au niveau de la sensibilité des moyens nécessaires pour détecter une couche aussi mince, ainsi qu'à celui des moyens capables d'aspirer exclusivement mais totalement, ces particules.

[0005] Came on l'a vu précédemment, la réduction du diamètre de l'éprouvette conduirait à un allongement proportionnel du temps de centrifugation nécessaire pour obtenir la séparation. Or, une augmentation de l'épaisseur de la couche de particules devrait être très sensible pour permettre d'effectuer la séparation et le prélèvement automatique de telles particules en utilisant des moyens de détection et de prélèvement simples.

[0006] Outre l'allongement du tenps de centrifugation, la réduction du diamètre de l'éprouvette donne une moins bonne séparation qui se traduit par une contamination des globules rouges par des lymphocytes ainsi que par une augmentation du nombre de cellules mortes.

[0007] Il a déjà été proposé dans le brevet US 3.513.976 de former une éprouvette avec une partie intermédiaire de section sensiblement plus faible, dont le volume et la position relativement aux autres parties de l'éprouvette sont choisis pour correspondre à peu près à la portion de volume de leucocytes contenus dans un échantillon correspondant au volume de sang que peut contenir l'éprouvette ainsi qu'à la position de ces leucocytes après centrifugation de l'éprouvette dont l'axe longitudinal est orienté radialement par rapport à l'axe de rotation. Il est prévu par ailleurs, d'ajuster finement le niveau des leucocytes en ajoutant du mercure dans le fond de l'éprouvette. La centrifugation dans une telle éprouvette suppose un transfert des composants de densités différentes à travers l'étranglement de la partie intermédiaire. Si cet étranglement est inportant, la séparation par centrifugation peut s'avérer pratiquement irréalisable ou, pour le moins, nécessiter un allongement très considérable de la période de centrifugation.

[0008] Il a par ailleurs, été décrit par Harry Cutts en page 132 de son livre "Cell séparation methods in Hematology" publié par Acade- mic Press New York - Londres une installation comprenant une éprouvette dans laquelle est centrifugé le sang. Cette éprouvette est placée à l'intérieur d'un support dont le fond est muni d'un joint de néoprène. Une aiguille creuse est enfoncée à travers le fond du support, le joint néoprène et la paroi de l'éprouvette. Cette aiguille est reliée à un réservoir de bromobenzène lui-même relié à un réservoir d'eau par une pompe péristaltique. En panpant l'eau dans le réservoir de bromobenzène, celui-ci est chassé dans l'éprouvette à travers l'aiguille creuse. On a fixé au sommet de l'éprouvette un bouchon conique, dont le centre est traversé par un tube de petit diamètre, qui sert à récupérer les différentes phases liquides, au fur et à mesure qu'elles sont amenées à la sortie de ce tube de petit diamètre par le bromobenzène.

[0009] Il est évident qu'une telle solution ne permet pas d'envisager le traitement automatique de séries d'échantillons, comme ceci doit être fait dans des laboratoires bio-médicaux des hôpitaux et des centres de transfusion sanguine, tant les opérations nécessaires sont délicates. En outre, une telle solution nécessite au moins la vidange et la recharge périodique du réservoir de bromobenzène et le changement de l'aiguille creuse destinée à traverser le fond de l'éprouvette, dans la mesure où celle-ci vient en contact avec l'échantillon à analyser. Il est encore à signaler que le bouchon conique, rapporté dans l'ouverture de l'éprouvette, présente des arêtes vives qui sont susceptibles de créer des remous lors de l'écoulement du liquide à analyser et donc de mélanger les différentes phases séparées par la centrifugation.

[0010] Le but de la présente invention est de remédier au moins en partie aux inconvénients susmentionnés de façon à faciliter le prélèvement des particules séparées par centrifugation sans augmenter le temps nécessaire à la séparation ou affecter la qualité de cette séparation, par une solution qui se prête particulièrement bien à l'automatisation de ce prélèvement.

[0011] A cet effet, la présente invention a pour objet une éprouvette de séparation par centrifugation d'un liquide physiologique et de collection d'au moins un des constituants de densité donnée, présentant deux parties de sections circulaires différentes reliées par une partie de liaison dont la section passe progressivement de l'une à l'autre desdites sections. Cette éprouvette est caractérisée par le fait qu'elle est ouverte à ses deux extrémités, les sections de ces ouvertures correspondant auxdites sections respectives, l'ouverture présentant la plus grande de ces sections formant l'extrémité d'un cylindre de centrifugation qui reçoit un piston ajusté de façon étanche et l'autre de ces ouvertures, présentant la plus petite section, constituant l'ouverture par laquelle lesdits constituants séparés dans ledit cylindre peuvent être collectés, consécutivement au déplacement dudit piston en direction de cette ouverture.

[0012] L'avantage de l'éprouvette objet de l'invention réside essentiellement dans son autonomie, puisqu'elle comporte les éléments qui permettent de séparer les constituants par centrifugation et ceux qui permettent d'amener ensuite ces constituants au niveau de l'ouverture de section réduite en vue de les collecter, cette ouverture de section réduite augmentant considérablement l'épaisseur des différentes couches et réduisant leur interfaces en fonction du carré du rapport des rayons entre le corps cylindrique de l'éprouvette et l'ouverture de section réduite où se fait la collecte de ces constituants. Elle se prête donc bien à une installation autamati- que qui comporterait un poste de centrifugation et un poste de collection des constituants après quoi l'éprouvette peut être jetée, vu le très faible coût qu'elle représente.

[0013] La figure unique du dessin annexé illustre, schématiquement et à titre d'exemple, une forme d'exécution d'un dispositif pour la mise en oeuvre du prooédé objet de l'invention.

[0014] Ce dispositif comporte une éprouvette 1 transparente présentant une partie la de diamètre supérieur à une partie lb, reliées par une porticn Id dans laquelle la section varie progressivement. Le fond de la partie la est constitué par un piston 2 retenu par un rebord 1c. Pour l'opération de prélèvement, le piston 2 est disposé coaxia- lement à une tige d'entraînement à crémaillère 3 en prise avec un pignon 4 solidaire de l'arbre de sortie d'un moteur électrique 5 relié à un poste de commande 6. Ce poste de commande est relié à une cellule photo-électrique 7 disposée vis-à-vis d'une source de luniè- re 8, ces deux éléments se trouvant de part et d'autre de la partie 1b de l'éprouvette 1 à proximité de sa sortie et servant à détecter le niveau des différents produits issus de la séparation du liquide physiologique introduit dans l'éprouvette. Deux pointes de pipettes 9 et 10 sont introduites dans l'extrémité ouverte de l'éprouvette 1 et sont reliées au poste de commande 6. L'une de ces pipettes est destinée à prélever les parties de liquide situées au-dessus de la couche de particules à prélever tandis que l'autre pipette recueillera ces particules.

[0015] Etant donné que les constituants du liquide centrifugé sont destinés à être recueillis au fur et à mesure de leur écoulement à travers l'ouverture de sortie de l'éprouvette, la longueur de la partie 1b est sans importance et l'ouverture de sortie peut donc se situer directement au niveau où la partie 1d a sa section la plus faible. Par ailleurs, le rebord lc destiné à retenir le piston 2 lors de la centrifugation n'est pas indispensable dans la mesure où, lors de la centrifugation, l'éprouvette peut être disposée dans un logement cylindrique orienté radialement à l'axe de centrifugation et dont le fond, tourné vers l'extérieur, sert lui-même à retenir le piston 2.

[0016] A titre d'exemple, le dispositif décrit peut être utilisé en vue de séparer et de prélever les lymphocytes d'un échantillon de sang d'un patient en vue de procéder à un test de mobilité électrophorétique macrophage basé sur la détection de la sensibilité des lymphocytes vis-à-vis d'un antigène issu d'une tumeur.

[0017] Le rapport entre l'épaisseur ou la hauteur de la couche de lymphocytes et sa section est une fonction inverse de la quatrième puissance du diamètre du tube. En effet, si h = hauteur de la couche, s = section transversale de cette couche, v = volume de la couche, ra = h/s, c = constante, f = fonction.

[0018] En pratique, si, par exemple, le diamètre du tube diminue de 20 mm à 5 mm (un facteur de 4), la hauteur de la couche de lymphocytes augmente d'un facteur de 16, soit de l'ordre de 2 mm à 32 mm et le rapport h/s augmente d'un facteur de 256 ou passe de 0,006 à 1,54.

[0019] Pour réaliser cette séparation et ce prélèvement de lymphocytes selon l'invention, on procède tout d'abord selon la technique habituelle, à savoir, on dilue l'échantillon de sang du patient, par exemple, avec une solution de sels de Hank (Hank's BSS), on introduit ensuite 5 ml de Ficoll-Paque (marque déposée) qui est une solution aqueuse de densité 1,07710,001 g/cm3 contenant 5,7 g de Ficoll 400 qui est un polymère synthétique de poids moléculaire élevé (M_w 400 000) de saccharose et d'épychlorohydrine facilement soluble dans l'eau et 9 g d'un agent anti-bactérien, le diatrizoate de sodium, pour 100 ml, dans une éprouvette 1 de 20 ml. On additionne ensuite 10 ml de sang dilué dans l'éprouvette 1. On centrifuge cette éprouvette avec son axe incliné ou horizontal et le piston 2 dirigé vers l'extérieur, à 400 g durant 30 à 40 min.

[0020] A la suite de la séparation par centrifugation, quatre couches se sont formées dans l'éprouvette. La couche supérieure comporte essentiellement le plasma, ensuite vient la mince couche comprenant des lymphocytes, puis le milieu de séparation formé dans cet exemple par le Fiooll-Paque et enfin les globules rouges et autres particules cellulaires. Ensuite, on dispose cette éprouvette 1 vis-à-vis de la tige d'entraînement à crémaillère 3.

[0021] En poussant le piston 2 vers le haut, la tige d'entraînement à crémaillère 3 amène le sommet de la couche de plasma dans la partie rétrécie lb de l'éprouvette 1. Lorsque le sommet de cette couche arrive vis-à-vis du détecteur photo-électrique 7, le poste de commande 6 met en marche une des pipettes 9 et 10 qui est destinée à aspirer le plasma au fur et à mesure de son ascension dans la partie lb de l'éprouvette. Dès que l'interface plasma lymphocyte arrive au niveau du détecteur photo-électrique 7, le poste de commande 6 arrête la pipette aspirant le plasma et met en marche l'autre pipette qui aspire alors la couche de lymphocytes jusqu'à ce que le détecteur photo-électrique 7 détecte l'arrivée du bas de cette couche, moment auquel la pipette aspirant les lymphocytes est arrêtée ainsi que le moteur 5.

[0022] On procède alors au lavage des lymphocytes selon le processus classique qui consiste à ajouter de nouveau un milieu électrophorétique macrophage, à centrifuger à 250 g pendant 10 minutes, à éliminer le liquide surnageant et à répéter cette opération autant de fois que nécessaire, par exemple trois fois.

[0023] Ensuite, les lymphocytes sont comptés, incubés avec l'antigène et le test de mobilité électrophorétique macrophage susmentionné est réalisé.

[0024] Des essais comparatifs ont été réalisés avec le sang d'un donneur masculin en utilisant la méthode manuelle de prélèvement avec éprouvette classique et par ailleurs, en utilisant également la méthode de prélèvement manuelle mais avec l'éprouvette objet de la présente invention.

[0025] Un étalonnage des composants du sang à tester a été réalisé par différents comptages au microscope et en établissant la moyenne de ces comptages. Le comptage moyen des globules blancs basé sur six comptages distincts a donné 6650 cellules/mm³ ou 6,65 x 10⁶/ml. On a ensuite déterminé le taux moyen de lymphocytes à l'aide de trois comptages, ce qui a donné 52% de lymphocytes soit 6,65 x 52% x 10⁶/ml = 3,46 x ₁₀⁶_.

[0026] Ensuite, on a procédé à la collection des lymphocytes à l'aide de l'éprouvette objet de l'invention, en utilisant un échantillon de 10 ml de sang dilué à 50% dans une solution de sels de Hank (Hank's BSS) et traité préalablement à l'héparine contre la coagulation. On a placé ces 10 ml dans une éprouvette dont le corps la a 20,3 mm de diamètre et l'ouverture de sortie de la partie lb 8 mm en ajoutant 5 ml de Ficoll-Paque (marque déposée). On a placé cette éprouvette dans un support cylindrique dont le fond présente une ouverture de diamètre inférieur à celui du piston 2 et on a centrifugé cet échantillon à 400 g pendant 35 minutes.

[0027] Ensuite, on a placé l'éprouvette sur un appareil muni d'une tige d'entraînement à crémaillère 3, mais la collecte a été réaliser manuellement au niveau de l'ouverture de sortie de l'éprouvette. On a constaté que le déplacement de la couche de lymphocytes est obtenu avec une remarquable stabilité de ses interfaces.

[0028] Les résultats obtenus sont 3,07 x 10⁶/ml de globules blancs total dont 92% de lymphocytes soit un rendement de 3,07 x 92/3,46 = 81,6% par rapport au comptage de référence, avec moins de 2% de cellules mortes.

[0029] Le même test réalisé avec une éprouvette classique a donné 2,4 x 10⁶/ml de globules blancs total dont 82% de lymphocytes soit un rendement de 2,4 x 82/3,46 = 56,8% et environ 1% de cellules mortes.

[0030] A titre indicatif, le fabricant du Ficoll-Paque, les laboratoires Pharmacia Fine Chemicals AB, indique un rendement normal de 50% + 15%.

[0031] On constate que l'éprouvette objet de l'invention permet d'ob-

Revendications

Eprouvette de séparation par centrifugation d'un liquide physiologique et de collection d'au moins un des constituants de densité donnée, présentant deux parties de sections circulaires différentes reliées par une partie de liaison dont la section passe progressivement de l'une à l'autre desdites sections, caractérisée par le fait qu'elle est ouverte à ses deux extrémités, les sections de ces ouvertures correspondant auxdites sections respectives, l'ouverture présentant la plus grande de ces sections formant l'extrémité d'un cylindre de centrifugation qui reçoit un piston ajusté de façon étanche et l'autre de ces ouvertures présentant la plus petite section, constituant l'ouverture par laquelle lesdits constituants séparés dans ledit cylindre peuvent être collectés, consécutivement au déplacement dudit piston en direction de cette ouverture.

Dessins